• у больных маститом коров в конце лактации преобладающее значение в патогенезе болезни имеет высокая антигенингибирующая активность сыворотки крови ( г = 0,73; р

•

• Интенсивность этих изменений определяется уровнем циркулирующих иммунных комплексов (Сз г = 0,91; р

Изучение антимикробной активности различных соотношений пролонгированного диоксидина с липосомальным гентомицином проводилось в отношении музейных штаммов кишечной палочки - Е. Coli. 866, стафилококка - St. aurens 209 Р., стрептококка - streptococcus группы В "по Ландсфильду"

Результаты экспериментов на музейных штаммах различных компонентов пролонгированного диоксидина и липосомального гентомицина представлены в таблице 16.

В эксперименте установлено, что наиболее выраженным антимикробным действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов обладает комбинация соотношении: ПД-1,0:ЛГ-3,0

Фракциональная ингибирующая концентрация (ФИК) диоксидина оптимальной комбинации в опыте Streptococcus agalactiae и Streptococcus группа В (по Ландсфилду) составила 0,15, липосомального гентамицина -0,20, а сумма фракциональных ингибирующих концентраций (ФИК-индекс) -равнялся 0,33, ФИК пролонгированного диоксидина в опыте с культурой Escherichia coli 866 составил 0,13; липосомального гентамицина - 0,19. ФИК-индекс комбинации в опыте с культурой Escherichia coli 866 равнялся 0,32. ФИК пролонгированного диоксидина в опыте с культурой Staphylococcus aureus 209 Р составила 0,13, липосомального гентамицина -0,19; ФИК-индекс составил - 0,32.

Полученные результаты свидетельствуют о достаточно высокой степени синергидности комбинации пролонгированного диоксидина и липосомального гентамицина в соотношении 1:3.

Изучение оптимального соотношения диоксидина и липосомального гентамицина в опытах in vivo показало (табл. 17), что лучший терапевтический эффект достигается при лечении мастита у коров гентодиамастом со следующим соотношением компонентов: пролонгированного диоксидина - 1,0 г; липосомального гентамицина - 3,0 г. Лечебная эффективность препарата с таким соотношением препаратов составила 89,66%, тогда как лечебная эффективность других композиций составила 67,86-75,86%. Эффективность лечения гентодиамастом с оптимальным соотношением компонентов были на 21,74 - 13,8% выше по сравнению с лечением композициями с другим соотношением компонентов.

Проведенные исследования показали, что гентодиамаст обладает высокой антимикробной активностью. Наиболее выраженное действие он проявляет в отношении кокковой микрофлоры: стрептококков и стафилококков.

Бактериостатическое действие гентодиамаста в отношении золотистого стафилококка составило 9,75 мкг/мл, стрептококка из группы В -19,5 мкг/мл и эшерихий 866 штамма - 39 мкг/мл, что в несколько раз превосходило активность широко известных протимаститных препаратов. Бактерицидная активность гентодиамаста в 2 раза превосходила бактериостатичеекую в отношении стрептококков, в 4 раза - золотистого стафилококка и эшерихий

Токсикометрические исследования, проведенные в остром опыте, позволили рассчитать параметры острой токсичности диеномаста. При этом, LD50 для белых мышей составила 10,25 мл/кг (498,5 мг/кг по АДВ) и 22,08 мл/кг (518,8 мг/кг по АДВ) для белых крыс.

Величины LDj6, и LDg4 для белых мышей были равны 9,35 мл/кг (254,0 мг/кг по АДВ) и 16,16 мл/кг (646,4 мг/кг по АДВ), для белых крыс -17,68 мл/кг (327,2 мг/кг по АДВ) и 17,49 мл/кг (699,6 мг/кг по АДВ), соответственно.

Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс сопровождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выраженное угнетение, развивалось состояние глубокого сна, переходящее затем в комму. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители, не принимали корм.

К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Дыхание часто становилось поверхностным прерывистым. Развивалась синюшность кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.

В опыте по уточнению МПД гентодиамаста для белых мышей было сформировано 6 групп животных с массой тела 19-21 грамм по 5 голов в каждой. Мышам пяти опытных групп вводили подкожно гентодиамаста в дозах: 5,0; 5,1; 5,2; 5,3; 5,4; 5,5 мл/кг. Животные шестой группы были контрольными. Наблюдение за животными вели в течение 10 дней. Установлено, что максимально переносимая доза диеномаста для белых мышей равна 5,3 мл/кг. При введении доз 5,4 и 5.5 мл/кг отмечалась гибель по одной мыши в группе соответственно на 5-й и 2-й день после введения.

Учитывая результаты изучения острой токсичности и результаты определения МПД гентодиамаста для препарата установлена тест-доза на безвредность - 0,1 мл/на мышь с массой тела 19-21 грамм.

Проведенными исследованиями установлено, что многократное парентеральное применение гентодиамаста в дозе 0,25 мл\кг массы тела (1/50 LD50, полученной при изучении острой токсичности), а также в дозе 0,6 мл/кг массы тела и 1,3 мл/кг массы тела (1/20 и 1/10 LD50 (1 в остром опыте) не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения гентодиамаста, так и в течение 2-х недель после окончания применения гентодиамаста оставались в пределах нормы. За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, у них не отмечалось нарушение аппетита, были сохранены рефлексы. Проведенное взвешивание животных показало, что скорость роста крыс опытных существенно не отличалась от скорости роста крыс контрольных группы. Среднесуточный прирост массы тела за весь период наблюдения (40 дней) составил 106,9% при применении

гентодиамаста в трехкратной ориентировочно-терапевтической дозе и 97,9% при применении гентодиамаста в дозе 1,3 мл/кг массы тела.

При увеличении дозы гентодиамаста отмечалась устойчивая тенденция к более напряженному функционированию выделительной системы и печени.

При 20-ти дневном применении препарата в дозе 1,9 мл/кг массы тела (1/10 LD50 полученной при определении острой токсичности) у крыс достоверно возрастало содержание в сыворотке крови мочевины на 42,7%; креатинина - на 27,4%, активность АлАТ - на 65,7 % и уровень билирубина -на 92,3%. Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы находилось в пределах нормы для данного вида животных. С увеличением дозы гентодиамаста наблюдалось также достоверное возрастание бактерицидной активности на 45,6%.

С учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности гентодиамаста и LD50, полученной при определении острой токсичности коэффициент кумуляции препарата составил - 2 (Ккум = 2.0).

В результате клинических исследований состояния организма подопытных кроликов после инсталляции препарата гентодиамаст не выявлено изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений.

При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век опытных глаз животных установлено, что препарат гентодиамаста вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 2-3 часа после закапывания, которое проходит уже к 4 часу.

Раздражающий эффект гентодиамаста при внутрикожном методе введения оценивали по интенсивности окрашивания тканей по 8-ми бальной системе. В опыте установлено, что через 30 минут после введения красителя гентодиамаста оказывал слабое раздражающее действие, через 60 и 180 минут раздражающее действие препарата было умеренным, через 4 часа -слабым, а через 5 часов отсутствовало.

Изучение аллергеных свойств гентодиамаста методом эпикутанных аппликаций и выявление кожных реакций (покраснения, зуда и отека кожи) на введение гомологичной и гетерологичной сыворотки, раствора бихромата калия и сульфанола не выявило аллергеных свойств.

Установлено, что в течение опыта изменений со стороны общего состояния организма животных (температура, частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков, сокращений рубца) не наблюдалось. Реакция секретов вымени опытных четвертей с 2 % раствором мастидина в течение 6-48 часов были сомнительной - или слабо положительной.

В опыте по изучению влияния гентодиамаста на качество продуктов не установлено существенных различий между качеством проб мяса и бульона кроликов контрольной и опытной групп. Пробы мяса имели хороший, свойственный продукту цвет и вид на разрезе, ароматный запах, приятный вкус, нежную консистенцию и достаточную сочность. Бульоны были прозрачные, слегка золотистого цвета с капельками жира, приятные на вкус и достаточно ароматные. Общая органолептическая оценка проб мяса и бульона - хорошая.

Исследования содержания диоксидина в крови, молоке и моче коров на 1, 3, 5, 7 и 9 сутки после окончания применения гентодиамаста показали, что препарат интенсивно выводится из организма в первые трое суток. Диоксидин в первые сутки в молоке обнаруживался в пределах 1,9-2,2 мкг/мл, на 3 сутки - 0,8-0,9 мкг/мл, а на 5 сутки лишь в одной пробе его содержание составило 0,5 мкг/мл.

В крови содержание диоксидина определялось только на первые и третьи сутки, при этом оно составляло 1,5-1,7 и 0,6-0,7 мкг/мл соответственно. В моче содержание диоксидина определялось на уровне 1,8-2,1 мкт/мл в первые сутки, на третьи сутки - на уровне 0,8-0,9 мкг/мл, а на пятые сутки выявлялись следы в пределах 0,5 мкг/мл.

Следовательно, на седьмые сутки диоксидин полностью выводился из

организма. Содержание гентамицина в молоке, крови и моче коров после применения диеномаста обнаруживалось в течение 5 суток, но выведение ею из организма происходило, главным образом, в первые сутки.

Содержание гентамицина в молоке в первые сутки составляло 2,5-2.7 мкг/мл, на 3 сутки - 0,9-1,2 мкг/мл, а на 5 сутки - 0.3-0,4 мкг/мл. В крови содержание гентамицина было значительно ниже, но обнаруживалось на 5 сутки. В первые сутки в крови гентамицина обнаруживалось в пределах 1,51,7 мкг/мл, а на 3 сутки - 0,7-0,8 мкг/мл, а на 5 сутки - 0,1 -0,2 мкг/мл.

Аналогичная картина по содержанию гентамицина наблюдалась и в моче, т.е. в первые сутки обнаруживалось гентамицина в пределах 1,5-1,7 мкт/мл, на 3 сутки - 0,6-0,8 мкг/мл, а на 5 сутки - следы (0,1 мкт/мл).

Таким образом, через 7 суток после внутримышечного введения Гентодиамаста в исследуемых биологических жидкостях (молоке, крови и моче) активнодействуюшие вещества (гентамицин и диоксидин) не обнаруживались.

Анализ материала полученного в ходе фармакотоксикологического изучения гентодиамаста, позволяет сделать следующее заключение:

• гентодиамаст представляет собой композицию пролонгированоого диоксидина и липосомального гентомицина в соотношении 1:3, которое оказывает бактерицидное и бактериостатическое действие в отношении агалактийного стрептококка, золотистого стафилококка и кишечной палочки;

• учитывая результаты изучения острой токсичности и результата определения МПД гентодиамаста для репарата установлена тест-доза на безвредность - 0,1 мл/мышь с массой тела 19-21 грамм;

• с учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности гентодиамаста к LD50 полученный при определении острой токсичности при коэффициенте кумуляции препарата - 2 (Ккум=2,0);